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    超微量分光光度計可用于核酸和蛋白質的定量

    發布時間:2019-05-10      點擊次數:1225
         分光光度計是運用分光光度法對有機物開展酶聯免疫法定量分析的設備。因為核酸,蛋白酶聯免疫法及其病菌生長溶度的酶聯免疫法樣本量不大,因此超微量分光光度計應運而生。
        核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率很高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的吸收峰的吸收波長260nm,每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
        比色法蛋白質定量,蛋白質通常是多種蛋白質的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關,從而反應蛋白質濃度。比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等幾種方法。BCA是一種較新的、更敏感的蛋白測試法,要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應產生Cu+,后者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長。此化合物與蛋白濃度的線性關系*,反應后形成的化合物非常穩定。相對于Lowry法,操作簡單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質之間以及去污劑的干擾。

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